罗格列酮对肺纤维化大鼠TGF—β1表达的影响

维普资讯 http://www.cqvip.com 山东医药２００８年第４８卷第ｌ９期　肝由于热缺血、冷缺血、再灌注损伤等诸多因素影　响，早期新肝功能明显下降，氯胺酮代谢缓慢，大鼠　术后苏醒时间相对延长，这不仅增加了呼吸抑制的　风险，更容易出现呼吸道分泌物堵塞。相反乙醚由　气道给药、易于代谢、无呼吸抑制等作用特点，就显　示出适合肝移植受体的麻醉要求，撤药后大鼠很快　射麻醉效果满意可靠，相反受体大鼠采用氯胺酮麻　醉手术死亡率却显著增高，因此受体大鼠在肝移植　手术中采用乙醚麻醉更安全可取。　［参考资料］　［１］徐明清，姚榛祥，贺强．大鼠原位部分肝移植与围手术期处理的　技术改进［Ｊ］．重庆医学，２００３，３２（２）：１３５—１３６．　［２］钱晓蜂，王学浩，张蜂，等．大鼠减体积肝移植模型的技术改进及　苏醒，减少了麻药长期作用的不利风险。因此肝移　再生的初步观察［Ｊ］．南京医科大学学报（自然科学版），２００３，　植受体大鼠采用乙醚开放吸人全麻是安全可取的。　２３（３）：２２１－２２３．　综上所述，正确的麻醉选择是大鼠肝移植动物　（收稿１３期：２００７—１２－２９）　模型成功建立的关键，供体大鼠采用氯胺酮腹腔注　罗格列酮对肺纤维化大鼠ＴＧＦ一１３　表达的影响　蒋莉　。张国俊ｈ，邢丽华　，陈奎生　，高冠民　，王华启　，王建辉　（１郑州大学第一附属医院，河南郑州４５００５２；２郑州大学医学院）　［摘要］　将４５只ｓＤ雄性大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，模型组和治疗组大鼠气管内一次性滴注博　莱霉素．Ａ５（ＢＬＭ．Ａ５），对照组大鼠滴注等体积生理盐水。注药后治疗组灌服罗格列酮８　ｍｇ／（ｋｇ・ｄ），对照组、模型　组给予等体积生理盐水。各组动物于７、１４、２８　ｄ随机处死５只，取肺组织进行ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色，免疫组化法检测　肺组织转化生长因子Ｂ　（ＴＧＦ—Ｂ　）的表达水平。ＨＥ染色示治疗组各时期肺泡炎和肺纤维化程度均较模型组轻；　Ｍａｓｓｏｎ染色示治疗组胶原沉积明显少于模型组。治疗组与模型组各时期ＴＧＦ．Ｂ　表达水平均有统计学差异。提示　罗格列酮能减轻ＢＬＭ．Ａ５诱导的肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化，其机制可能与抑制肺组织ＴＧＦ—Ｂ，表达有关。　［关键词］肺纤维化；博莱霉素；罗格列酮；转化生长因子－　［中图分类号］　Ｒ５６３　［文献标识码］　Ｂ　［文章编号］　１００２－２６６Ｘ（２００８）１９－００４１－０２　肺间质纤维化是一组病因及发病机制尚不完全　北京中杉金桥生物技术有限公司。仪器：ＨＰＩＡＳ－　明确的进行性肺疾病，是多种慢性肺疾病的共同结　１０００高清晰度彩色病理图文分析系统。　局。转化生长因子－１３　（ＴＧＦ－１３，）是已知最强的致纤　１．３方法　维化因子之一，可以促进成纤维细胞的增殖及胶原　１．３．１动物造模方法用１．５％戊巴比妥钠腹腔　沉积。罗格列酮是过氧化物酶体增殖物激活受体　注射麻醉（２．５　ｍｌ／ｋｇ）大鼠，仰卧固定于鼠台上，颈　（ＰＰＡＲ．　）的合成配体，ＰＰＡＲ一　具有调节物质代谢、　部酒精消毒后逐层分离并暴露气管，注射器经气管　抗炎及抗纤维化作用。２００７年３—６月，我们通过　软骨环间隙朝向心端刺人气管，然后缓慢注入０．３　博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型，观察ＴＧＦ一　ｍｌ博莱霉素生理盐水溶液（５　ｍｇ／ｋｇ），继续注入　１３　在肺组织的表达情况，探讨罗格列酮对肺间质纤　０．３　ｍｌ的空气，注后立即将动物直立并左右旋转，　维化的影响。　使药液在肺内均匀分布。对照组大鼠同样方法注入　１材料与方法　等体积的生理盐水。　１．１动物雄性ＳＤ大鼠４５只，体质量１８０—２５０　１．３．２动物分组和给药方法将大鼠随机分为模　（２２０　４－２５）ｇ，购自河南省实验动物中心。　型组、治疗组和对照组，每组１５只。对照组：实验第　１．２药物与试剂博莱霉素．Ａ５（ＢＬＭ－Ａ５，天津太　１天予气管内注人生理盐水，后连续用生理盐水灌　河药业有限公司），罗格列酮（文迪雅，葛兰素史克　胃至处死前一天。模型组：实验第１天予气管内注　公司），ＴＧＦ－１３　多克隆抗体及兔抗鼠ｓＰ试剂盒购自　入ＢＬＭ－Ａ５（５　ｍｇ／ｋｇ），后连续用生理盐水灌胃至处　死前一天。治疗组：实验第１天予气管内注人ＢＬＭ－　‘通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｇｊ＠ｚｇｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　Ａ５（５　ｍｇ／ｋｇ），后连续用罗格列酮（８　ｍｇ／ｋｇ）灌胃至　４１　维普资讯 http://www.cqvip.com

处死前一天。　１．３．３取材方法分别于造模７、ｌ４、２８　ｄ取材，每　次各组随机处死５只，共４５只。取肺脏固定于中性　福尔马林，常温保存备用。　１．３．４肺组织病理学检查ＨＥ染色观察肺泡炎　和肺纤维化，Ｍａｓｓｏｎ染色观察胶原沉积。　１．３．５免疫组化检测ＴＧＦ．Ｂ　的表达一抗为兔　抗鼠ＴＧＦ，Ｂ　多克隆抗体，稀释度为１：２００，按免疫　组化试剂盒说明书进行操作。以支气管黏膜上皮细　胞、肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞、成纤维细胞、血管　内皮细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性反应。　１．３．６半定量图像分析　显微镜下观察细胞浆中　染成棕黄色颗粒者为阳性。采用ＨＰＩＡＳ，１０００高清　晰度彩色图文病理报告分析系统在高倍镜视野　（４００　Ｘ）下随机取５个视野，测量各自阳性细胞中　阳性颗粒的平均光密度，计算各均值，作为该片的代　表值。　１．３．７统计学方法　采用ＳＰＳＳ　１１．０统计软件包　进行统计学处理，各组数据均采用ｘ±ｓ表示，方差　齐采用单因素方差分析，方差不齐用非参数检验。　以Ｐ≤０．０５为有统计学差异。　２结果　２．１肺组织形态学观察　①肉眼观察：对照组各　时期双肺呈粉红色，弹性良好，肺表面光滑。模型组　７　ｄ肺组织肿胀明显，肺表面可见片状出血点及淤　斑；１４　ｄ双肺灰白色，局部可见结节样改变；２８　ｄ肺　组织成苍白色，弹性降低，表面有结节样改变。治疗　组各时期表现较模型组减轻。②光镜观察：ＨＥ切　片显微镜下观察，对照组各时期肺支气管和肺泡结　构正常；模型组７　ｄ肺泡腔及间隔内有炎性细胞渗　出，肺泡间隔增宽；１４　ｄ肺泡腔内炎性细胞渗出减　少，肺泡间隔内成纤维细胞增生；２８　ｄ肺泡结构破　坏，形成纤维化。治疗组各时期肺泡炎和肺纤维化　程度均较模型组轻。③肺组织胶原沉积情况：Ｍａｓ—　ｓｏｎ染色切片显微镜下观察发现，模型组７　ｄ肺泡腔　内见渗出物及炎性细胞；１４　ｄ炎性渗出减轻，肺泡　间隔内见成纤维细胞；２８　ｄ可见支气管壁及其周　围，血管周围及肺间质可见着蓝色胶原。治疗组胶　原沉积较模型组明显减轻。对照组未见胶原沉积。　２．２　ＴＧＦ，Ｂ　表达肺组织中ＴＧＦ—ｐ　蛋白主要在　胞浆表达，并主要分布于支气管上皮细胞、肺泡巨噬　细胞、肺泡上皮细胞和肺成纤维细胞。各组肺组织　ＴＧＦ．Ｂ　蛋白表达水平比较见表１。　３讨论　近年来罗格列酮降糖外的作用得到广泛研究，　其抗纤维化作用研究主要集中在肝、肾间质和心脏　４２　山东医药２００８年第４８卷第ｌ９期　表ｌ各组肺组织ＴＧＦ—ｇｌ蛋白表达水平　比较（　±ｓ）　注：与对照组比较，　Ｐ＜０．０１；与模型组比较，　Ｐ＜０．０５，‘Ｐ＜　０．Ｏ１；与同组前一时间段比较，　Ｐ＜０．０１　的纤维化¨　Ｊ，而对肺问质纤维化研究较少。本研　究采用国际通用的气管内注入博莱霉素方法复制肺　问质纤维化模型。实验中观察到注入博莱霉素后随　着时间变化大鼠肺先经历肺泡炎阶段渐变为肺间质　纤维化阶段，Ｍａｓｓｏｎ染色也发现从第ｌ４天开始支　气管、血管及肺问质出现胶原沉积，第２８天胶原沉　积达高峰，这些均说明复制动物模型成功。肺组织　病理学无论大体观察还是ＨＥ染色、Ｍａｓｓｏｎ染色光　镜观察发现治疗组肺泡炎及肺纤维化程度均较模型　组减轻，说明罗格列酮能减轻肺泡炎和肺纤维化程　度，与Ｇｅｎｏｖｅｓｅ等　的研究一致。　ＴＧＦ．Ｂ　是目前肺纤维化研究热点和重要的药　物作用靶点。ＴＧＦ．Ｂ　可以促进成纤维细胞增殖和　聚集，还可促使成纤维细胞表型向成肌纤维细胞表　型转化，影响ＥＣＭ的形成和降解。本研究发现模型　组肺组织ＴＧＦ—Ｂ，表达较正常组明显升高，第ｌ４天　达高峰，说明ＴＧＦ—Ｂ　参与肺泡炎的形成及在肺间　质纤维化发生发展中起重要作用。本研究中治疗组　各时期ＴＧＦ，Ｂ，表达与模型组相比差异有显著性，　其中第ｌ４天第２８天差异有极显著性，随着用药时　间延长，ＴＧＦ，Ｂ　降低越明显，至第２８天ＴＧＦ—ｐ表达　与对照组接近，推测罗格列酮可能是通过抑制ＴＧＦ—　Ｂ，表达减轻肺泡炎和肺纤维化程度。由于ＴＧＦ—ｐ　表达在早期即开始升高，推测早期用药干预ＴＧＦ—Ｂ　的表达较晚期用药效果好。　［参考文献］　［１］Ｉ出　Ｍ，Ｔｏｕｙｚ　ＲＭ，Ｖｉｅｌ　ＥＣ，ｅｔ　ａ１．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｍｌｉｆｅｒａｔｏｒ・ａｃｔｉｖａ—　ｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ａ　ａｎｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ一　ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ　ｐｒｅｖｅｎｔ　ｃａｒｄｉａｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｍｉｎｅｒａｌｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，　２００３，４２（４）：７３７－７４３．　［２］ＣＭｋｉｎ　ＡＣ，Ｇｉｕｎｔｉ　Ｓ，Ｊａｎｄｅｌｅｉｔ—Ｄａｈｍ　ＫＡ，ｅｔ　ａ１．ＰＰＡＲ—ｏ［ａｎｄ　１　ａｇ－　ｏｎｉｓｔｓ　ａｔｔｅｎｕａｔｅ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｋｉｄｎｅｙ　ｉｄｓｅ￣ｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｐｏｌｉｐｏｐｍｔｅｉｎ　Ｅ　ｋｎｏｃｋ—　ｏｕｔ　ｍｏｕｓｅ［Ｊ］．Ｎｅｐｈｒｏｌ　Ｄｉａｌ　Ｔｒｎａｓｐｌｎａｔ，２ＯＯ６，２１（９）：２３９９－２４０５．　［３］Ｌｅｃｌｅｒｃｑ　ＩＡ，Ｓｅｍｐｏｕｘ　Ｃ，Ｓｔａｒｋｅｌ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｌｉｍｉｔｄｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｉ—　ｃａｃｙ　ｏｆ　ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ　ｏｎ　ｐｍｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ［ｊ］．　Ｇｕｔ，２００６，５５（７）：１０２０・１０２９．　［４］Ｇｅｎｏｖｅｓｅ　Ｔ，Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ　Ｓ，Ｄｉ　Ｐａｏｌａ　Ｒ．ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ　ｎａｄ　１５－ｄｅｏｘｙ・Ｄｅｌｔａｌ２，１４・ｐｒｏｓｔａｇｌｎａｄｉｎ　Ｊ２　ｏｎ　ｂｌｅｎｍｙｅｉｎ・ｉｎｄｕｃｅｄ　ｌｕｎｇ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｊ，２００５，２５（２）：２２５・２３４．　（收稿日期：２００８－０３－０１）